文章目录

1 材料与方法

1.1 实验动物及分组

1.2 脑立体定位注射及给药

1.3 心肌缺血再灌注模型构建

1.4 检测交感神经系统活性

1.5 观察VMH自发荧光以及分析VMH c-fos免疫荧光染色

1.6 HE染色观察心肌细胞改变

1.7 荧光定量PCR检测心肌中PKCβ2的m RNA表达水平

1.8 Western Blotting检测心肌中PKCβ2的蛋白表达水平

1.9 统计学分析

2 结果

2.1 激活组VMH活性及交感神经系统活性显著升高

2.2 激活VMH恶化心肌缺血再灌注损伤

2.3 激活VMH促进缺血再灌注损伤心肌中PKCβ2表达

3 讨论

文章摘要:目的探讨化学遗传激活下丘脑腹内侧核（ventromedial hypothalamus,VMH）对大鼠心肌缺血再灌注损伤后交感神经系统活性及心肌细胞的影响。方法 12只Sprague-Dawley雄性大鼠按照随机数表法分为对照组（N=6）和激活组（N=6）。通过脑立体定位技术对激活组大鼠VMH注射激活病毒,对照组大鼠VMH注射空载病毒。在注射病毒3周后,两组大鼠均接受连续2周腹腔注射氯氮平一氧化氮（Clozapine-N-Oxide,CNO）。完成连续2周CNO注射后,对照组和激活组均构建心脏缺血再灌注损伤模型。免疫荧光染色脑切片观察VMH活性变化（c-fos表达情况）;酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）检测血清去甲肾上腺素（norepinephrine,NE）浓度;苏木精-伊红染色（hematoxylin-eosin,HE）观察心肌组织改变;q RT-PCR和蛋白质印迹法（western blotting）检测心肌细胞蛋白激酶Cβ2（protein kinase Cβ2,PKCβ2）的m RNA和蛋白表达水平。结果与对照组相比,激活组VMH中c-fos表达增加[（1.00±0.11）比（1.78±0.16）,P<0.01],血清NE浓度显著升高[（9.70±0.27）nmol/L比（14.46±0.17）nmol/L,P<0.01],心肌细胞排列紊乱加重、胞质嗜伊红浓染,细胞水肿显著,心肌细胞平均面积显著升高[（2769.16±169.44）μm²比（7548.90±699.82）μm²,P<0.001],心肌PKCβ2的m RNA[（1.00±0.27）比（1.81±0.17）,P<0.05]和蛋白[（1.00±0.30）比（2.50±0.24）,P<0.05]表达水平显著增加。结论激活VMH可升高交感神经系统活性及恶化心肌缺血再灌注损伤。

文章关键词:

论文分类号:R542.2